唾液淀粉酶(pancreaticamylase)是由唾液腺分泌的一種水解酶,而淀粉經(jīng)唾液中淀粉酶的水解,生成糊精和麥芽糖。而知道唾液淀粉酶的最適ph對于自身有好處,那么唾液淀粉酶的最適ph是多少呢,又應(yīng)該怎么測定唾液淀粉酶的最適ph?
在底物過量的條件下,相同時間內(nèi),在溫度、酶濃度相同的條件下,接近最適 pH 的反應(yīng)體系中消耗淀粉的量最大,剩余淀粉與過量碘液生成的顏色越淺,吸光度越小,利用分光光度計測出各管的吸光度后, 取處于升高與降低趨勢之間的較小吸光度范圍對應(yīng)的 pH 值即為唾液淀粉酶的最適 pH。
一、 材料與方法 儀器:吸量管(5mL,1mL) ,試管,試管架,小燒杯, 722 型分光光度計,恒溫箱,吸耳球 試劑:0.01mol/L 碘液,0.2mol/L 磷酸氫二鈉,0.2mol/L 磷酸二氫鈉,淀粉溶液,唾 液,蒸餾水
二、方法:相同時間內(nèi),在溫度、酶濃度相同、pH 不同的條件下,酶的活度不同,水解的淀粉量不同,剩余的淀粉與過量碘液生成的顏色不同,通過在660nm測量吸光度,得出酶的最適 pH 范圍。
操作步驟:
1、唾液的獲?。赫麴s水漱口后在口中含蒸餾水,適宜時間后將蒸餾水連同唾液一同放置于事先準(zhǔn)備好的容器中即可,在實驗過程中應(yīng)注意酶的失活,為了防止此現(xiàn)象發(fā)生應(yīng)將此液體置于冰水中冷卻。
2、不同pH緩沖液配制:根據(jù)下表配置各個pH值的緩沖溶液各10ml
3、淀粉用量的確定(為了更好觀察顏色變化,可以加入適量蒸餾水使總體積相同?;靹颍^察現(xiàn)象,并選擇顏色變化適中一支,記錄其用量。)
4、酶液稀釋倍數(shù)確定(為了更好觀察顏色變化,可以加入適量蒸餾水使總體積相同,混勻,觀察現(xiàn)象,并選擇適中一支,記錄其稀釋倍數(shù)。)
5、最適pH確定(蒸餾水調(diào)零,測定660nm處吸光度A,最后以A為縱坐標(biāo),pH為橫坐標(biāo)作圖,取曲線最低點(diǎn)對應(yīng)的pH值,即為唾液淀粉酶的最適pH值。)
從上述的實驗中或許可以得出6.8為曲線最低點(diǎn)對應(yīng)的pH值,即為唾液淀粉酶的最適pH值。但是需要注意的是淀粉酶的測定結(jié)果受方法的影響較大,怎么測定唾液淀粉酶的最適ph?不同方法參考值亦有所不同,臨床所用方法也較多,因此必須了解所用測定方法和其參考值,才能作出正確的診斷。