纖維素酶菌種選育及發(fā)酵工藝

作者:養(yǎng)生專家  時間:2013-09-09 00:00:00  來源: 大眾養(yǎng)生網(wǎng)

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日常我們聽得比較多的應該i啊是纖維素,相信大家對纖維素這個詞也并不陌生。但提起纖維素霉可能有部分讀者不是特別的了解。你知道纖維素霉的菌種選育是如何進行的嗎?下面小逼就帶大家一起來了解一下吧!

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纖維素酶菌種選育

菌種選育是纖維素酶生產(chǎn)的基礎性工作,國內(nèi)外許多專家進行了大量研究,為了生產(chǎn)高質(zhì)量的纖維素酶產(chǎn)品,王家林等(1996)在吸收國內(nèi)外經(jīng)驗的基礎上,先后引進了綠色木霉木10、綠色木霉Sn-91014、康氏木霉NT-15、黑曲霉XX-15A,在此基礎上,采用了紫外線、特定電磁波輻射、線性加速器,亞硝基胍等物理、化學的誘變方法,獲得了高產(chǎn)菌株NT15-H、NT15-H1、XT-15H、XT-15H1。其中木霉NT-15H固體培養(yǎng)活力經(jīng)輕工部食品質(zhì)量監(jiān)督檢測中心南京站檢測表明,濾紙活力為3670u/g, C1-酶活力24460u/g,Cx-酶活力1800u/g,已達到國際先進水平。

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此菌種在工廠化生產(chǎn)中性能穩(wěn)定。張苓花等(1998)采用康氏木霉W-925,J-931,經(jīng)過濃度為2%硫酸二乙酯和紫外線(15W、30cm、2min)復合誘變后,得到了產(chǎn)酶活性高的Wu-932菌種,該菌種CMC糖化力達到2975,濾紙?zhí)敲富钚詾?31,比出發(fā)菌W-925分別提高了100%和81%?;げ匡暳咸砑觿┘夹g服務中心王成書等(1997)采用該中心的里氏木霉A3先進行紫外線和亞硝基胍復合誘變后,將處理過的孢子接種于纖維雙層平板上,30℃培養(yǎng)5-8天,15℃放置7-10天,挑選透明圈直徑和菌落直徑比較大的單菌落進行三角瓶固態(tài)發(fā)酵再篩選,得到了產(chǎn)纖維素酶活力很高的里氏木霉91-3菌株。

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纖維素酶菌種易退化,退化后其產(chǎn)酶力明顯降低,其原因可能有三個方面:①經(jīng)誘變篩選的菌種發(fā)生回復突變。

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②自然負突變。

③菌種長時間低溫斜面保藏,會在分生孢子上長出次生菌絲,而次生菌絲所形成的分生孢子生命力弱,這可能是菌種退化的主要原因。為了避免纖維素酶菌種退化,張苓花等(1998)報道,采用砂土管保藏菌種。即將過篩洗凈的砂子與土以3:2比例混合分裝在試管內(nèi),用1kg/cm2壓力滅菌30分鐘共三次,將欲保存的斜面菌種制備成1000ml孢子懸浮液,每個砂土管注入0.5ml,搖勻,放入盛有無水CaCl2真空干燥器內(nèi)保存。經(jīng)測定,在所測的121天內(nèi),酶的活性基本不變;酶活性下降50%的時間,由常規(guī)方法的60天延長至160天,明顯地減緩了菌種退化速度。

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三、發(fā)酵工藝

纖維素酶的生產(chǎn)工藝主要有兩種,即固體發(fā)酵和液體發(fā)酵,其工藝如下:

1、影響產(chǎn)酶量和活力的因素:

影響纖維素酶產(chǎn)量和活力的因素很多,除菌種外,還有培養(yǎng)溫度、pH、水分、基質(zhì)、培養(yǎng)時間等。這些因素不是孤立的,而是相互聯(lián)系的。張中良等(1997)采用均勻設計Cl12(1210),以綠色木霉(T.ViriclePers.expr)為菌種,研究了影響產(chǎn)纖維素酶的五大因素對產(chǎn)酶量和活力的作用,認為基質(zhì)粗纖維含量為40%、初始pH7.5、加水4倍、在26-31℃條件下培養(yǎng)45h可獲得最大產(chǎn)酶量26mg/g和CMC酶活力20mg/g·h。王成華等(1997)也研究了其誘變篩選的里氏木霉91-3的產(chǎn)酶條件,結(jié)果表明該菌種以7:3的秸稈粉和麥麩,另添加4%硫酸銨、0.4%磷酸二氫鉀、0.1%硫酸鎂為最佳培養(yǎng)基,28-32℃為適宜培養(yǎng)溫度,30℃為最佳溫度,4%為最佳接種量,96h到達發(fā)酵高峰。張苓花等(1998)研究了以康氏木霉W-925為出發(fā)菌,經(jīng)誘變后得到的Wu-932纖維素酶高產(chǎn)菌的最佳發(fā)酵條件。

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結(jié)果表明,以1:2的麥麩和稻草粉為培養(yǎng)基,5%的接種量,稻草粉碎平均長度3-5mm,初始pH4-5,溫度在28-35℃,發(fā)酵時間72h為最佳發(fā)酵條件。

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