聚丙烯酰胺凝膠電泳，這是一種用聚丙烯酰胺凝膠作支持介質(zhì)的常用的電泳技術。它常常用來分離寡合苷酸以及蛋白質(zhì)。它常作為陰離子的去污劑，能夠作為助溶試劑和變形劑。在濃縮膠的作用里面經(jīng)常提到堆積的作用。濃度比較小的時候，孔徑就會比較大，下面我們來了解一下這方面的內(nèi)容。
簡介
作用原理：聚丙烯酰胺凝膠為網(wǎng)狀結構，具有分子篩效應。它有兩種形式：非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(Native-PAGE)和SDS-聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE);非變性聚丙烯酰胺凝膠，在電泳的過程中，蛋白質(zhì)能夠保持完整狀態(tài)，并依據(jù)蛋白質(zhì)的分子量大小、蛋白質(zhì)的形狀及其所附帶的電荷量而逐漸呈梯度分開。
而SDS-PAGE僅根據(jù)蛋白質(zhì)亞基分子量的不同就可以分開蛋白質(zhì)。該技術最初由shapiro于1967年建立，他們發(fā)現(xiàn)在樣品介質(zhì)和丙烯酰胺凝膠中加入離子去污劑和強還原劑(SDS即十二烷基硫酸鈉)后，蛋白質(zhì)亞基的電泳遷移率主要取決于亞基分子量的大小(可以忽略電荷因素)。
作用
SDS是陰離子去污劑，作為變性劑和助溶試劑，它能斷裂分子內(nèi)和分子間的氫鍵，使分子去折疊，破壞蛋白分子的二、三級結構。而強還原劑如巰基乙醇，二硫蘇糖醇能使半胱氨酸殘基間的二硫鍵斷裂。在樣品和凝膠中加入還原劑和SDS后，分子被解聚成多肽鏈，解聚后的氨基酸側(cè)鏈和SDS結合成蛋白- SDS膠束，所帶的負電荷大大超過了蛋白原有的電荷量，這樣就消除了不同分子間的電荷差異和結構差異。
SDS-PAGE一般采用的是不連續(xù)緩沖系統(tǒng)，與連續(xù)緩沖系統(tǒng)相比，能夠有較高的分辨率。
濃縮膠的作用是有堆積作用，凝膠濃度較小，孔徑較大，把較稀的樣品加在濃縮膠上，經(jīng)過大孔徑凝膠的遷移作用而被濃縮至一個狹窄的區(qū)帶。當樣品液和濃縮膠選TRIS/HCl緩沖液，電極液選TRIS/甘氨酸。電泳開始后，HCl解離成氯離子，甘氨酸解離出少量的甘氨酸根離子。蛋白質(zhì)帶負電荷，因此一起向正極移動，其中氯離子最快，甘氨酸根離子最慢，蛋白居中。電泳開始時氯離子泳動率最大，超過蛋白，因此在后面形成低電導區(qū)，而電場強度與低電導區(qū)成反比，因而產(chǎn)生較高的電場強度，使蛋白和甘氨酸根離子迅速移動，形成一穩(wěn)定的界面，使蛋白聚集在移動界面附近，濃縮成一中間層。
此鑒定方法中，蛋白質(zhì)的遷移率主要取決于它的相對分子質(zhì)量，而與所帶電荷和分子形狀無關。
