由于幼兒急疹的主要病因?yàn)镠HV-6和HHV-7,故幼兒急疹的檢查可以通過(guò)檢查以上兩者來(lái)進(jìn)行。HHV-6和HHV-7一般的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法包括采集患者的唾液、器官分泌物或外周血單核細(xì)胞分離培養(yǎng)病毒、PCR技術(shù)檢測(cè)病毒DNA以及ELISA法檢測(cè)血清中特異性IgM 及IgG抗體等。
1.血常規(guī)檢查 見白細(xì)胞總數(shù)減少,伴中性粒細(xì)胞減少。也可隨后出現(xiàn)白細(xì)胞總數(shù)增多。
2.病毒分離 病毒分離是HHV-6、7型感染的確診方法。HHV-6、7型可在新鮮臍血單核細(xì)胞或成人外周血單核細(xì)胞中增殖。但需在培養(yǎng)基中加入植物血凝素(PHA)、IL-2、地塞米松等物質(zhì)。感染細(xì)胞在7天左右出現(xiàn)病變,細(xì)胞呈多形性、核固縮、出現(xiàn)多核細(xì)胞。感染細(xì)胞出現(xiàn)病變后還可繼續(xù)生存7天,未感染細(xì)胞則在培養(yǎng)7天內(nèi)死亡。由于病毒分離培養(yǎng)費(fèi)時(shí),不適于早期診斷,一般只用于實(shí)驗(yàn)室研究。
3.病毒抗原的檢測(cè) 病毒抗原檢測(cè)適于早期診斷,但病毒血癥維持時(shí)間短,很難做到及時(shí)采取標(biāo)本。目前廣泛采用免疫組化方法檢測(cè)細(xì)胞和組織內(nèi)病毒抗原??乖?yáng)性結(jié)果可作為確診的依據(jù)。
免疫組化常用方法:①直接法;②間接法,經(jīng)過(guò)第二抗體放大效應(yīng)是其特點(diǎn);③PAP法,以過(guò)氧化物酶和抗過(guò)氧化物酶抗體形成復(fù)合物,通過(guò)第二抗體的橋接與第一抗體結(jié)合,然后以酶底物反應(yīng)檢出;④ABC法,生物素(Biotin)和卵白素(Avidin)為具有高度親合性的物質(zhì),一個(gè)卵白素分子可結(jié)合4個(gè)生物素。當(dāng)生物素標(biāo)上特定的標(biāo)記物質(zhì)后or與抗體結(jié)合后仍能與卵白素結(jié)合,因此,將抗體結(jié)合上生物素,然后與卵白素和帶有特殊標(biāo)記物的生物素的結(jié)合反應(yīng),而以適當(dāng)方式顯示;⑤S-P法(LSAB),采用生物素標(biāo)記的第二抗體與鏈霉素生物素蛋白連接的過(guò)氧化物酶及基質(zhì)素(底物)混合液來(lái)測(cè)定細(xì)胞和組織中的抗原;⑥EnvisionⅠ法(二步法),其原理為第二抗體上標(biāo)記有多聚物酶(HRP or AP)復(fù)合物與第一抗體結(jié)合。二抗上的多聚物可結(jié)合許多的HRP分子,使信號(hào)有顯著提高,敏感性較PAP法,ABC法高出幾十倍,背景因多聚物葡聚糖是人體內(nèi)不存在,無(wú)非特異性干擾,尤其是多聚物酶分子結(jié)合的第二抗體孵育時(shí)間短,該方法更省時(shí),簡(jiǎn)便。
4.病毒抗體的測(cè)定 采用ELISA方法和間接免疫熒光方法測(cè)定HHV-6、7型IgG、IgM抗體,是目前最常用和最簡(jiǎn)便的方法。IgM抗體陽(yáng)性,高滴度IgG以及恢復(fù)期IgG抗體4倍增高等均可說(shuō)明HHV-6、7感染的存在。當(dāng)從腦脊液內(nèi)測(cè)到IgM抗體或IgG抗體時(shí),提示中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染的存在。IgM抗體一般產(chǎn)生于感染后5天,可持續(xù)存在2~3周,IgG抗體于感染后7天產(chǎn)生,4周后達(dá)高峰,可持續(xù)長(zhǎng)時(shí)間。但由于皰疹病毒之間存在一定抗原交叉,其他皰疹病毒感染也可引起抗體增高,可用抗補(bǔ)體免疫熒光試驗(yàn)加以鑒別。
ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡(jiǎn)稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來(lái)的一種免疫酶技術(shù)。此項(xiàng)技術(shù)自70年代初問(wèn)世以來(lái),發(fā)展十分迅速,目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域
5.病毒核酸檢測(cè) 采用核酸雜交方法及PCR方法可以檢測(cè)HHV-6、7 DNA。由于HHV-6、7均存在潛伏感染,因此有時(shí)檢測(cè)出病毒的DNA,并不能確定處于潛伏狀態(tài)或激活狀態(tài)??捎枚?、半定量PCR來(lái)測(cè)定DNA的量,來(lái)明確是否存在活動(dòng)性感染。高濃度的病毒DNA提示活動(dòng)性感染的存在。
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),其英文Polymease Chain Reaction(PCR)是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法,由高溫變性、低溫退火及適溫延伸等幾步反應(yīng)組成一個(gè)周期,循環(huán)進(jìn)行,使目的DNA得以迅速擴(kuò)增,具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、省時(shí)等特點(diǎn)。它不僅可用于基因分離、克隆和核酸序列分析等基礎(chǔ)研究,還可用于疾病病的診斷或任何有DNA,RNA的地方。
對(duì)HHV-6、7感染的診斷,應(yīng)結(jié)合臨床表現(xiàn)及多項(xiàng)病因?qū)W檢查結(jié)果進(jìn)行綜合判斷。
一般病例無(wú)需特殊檢查,必要時(shí)可做X線胸片、心電圖等檢查。