HSV病毒可從氣管支氣管分泌物、支氣管肺泡灌洗液、肺組織中獲得。采用纖維支氣管鏡收集標本應(yīng)早期進行。經(jīng)皮細針抽吸肺活檢和開胸肺活檢無多大幫助。皮膚黏膜損害囊泡液體中病毒的最高分離率為80%～98%，當潰瘍結(jié)痂和愈合分離率則下降(<25%)。標本的收集和運送在分離病毒過程中相當重要。標本應(yīng)盡快收集，因為在疾病進展后分離到病毒的可能性減少。收集標本后及時接種，可能有較高的病毒分離率。必須注意運送和儲存標本的條件，在正式檢測前，標本不能放在-20℃的冰箱中冷凍;運送過程中標本可保存4℃ 48h。
HSV感染的實驗室診斷應(yīng)從兩方面評價：首先，確定病人是否正在排放病毒，有無存在HSV現(xiàn)行感染以進行積極的抗病毒治療。其次，在可疑患者病毒重新激活出現(xiàn)臨床癥狀前，確定病人血清抗體是否陽性，以檢查過去是否感染HSV，以確定在骨髓移植、器官移植、誘導(dǎo)化療前有無必要進行預(yù)防性抗病毒治療。
1.細胞培養(yǎng) 組織培養(yǎng)為最敏感和特異的診斷方法，亦可用于病毒的分型。在病毒高滴度的標本，24～48h內(nèi)可獲得陽性結(jié)果，接種后72h內(nèi)在90%的培養(yǎng)基中可產(chǎn)生特征性的細胞病變效應(yīng);而在低滴度的標本，7天后方可看到特征性變化。然而，組織培養(yǎng)并不能始終確立病毒的存在，這是因為標本的收集和運送欠妥以及使用抗病毒藥可能出現(xiàn)假陰性。
2.檢測病毒
(1)Papanicolaou(Pap)或Tzank試驗：是快速、便宜的細胞診斷方法，先進行病變部位的刮片細胞染色，能在20min內(nèi)顯示細胞改變，即多核巨細胞形成、胞質(zhì)空泡樣變和包涵體。陽性涂片結(jié)果可靠，但不能區(qū)分水痘-帶狀皰疹病毒(varicella-zoster virus，VZV)和HSV-1或HSV-2。陰性涂片亦不能排除皰疹病毒感染。在理想情況下，Tzanck涂片約50%陽性，其敏感性和特異性均較低，且依靠檢測者經(jīng)驗;由于許多技術(shù)和實際原因，應(yīng)用受限。
(2)單克隆抗體間接免疫熒光染色檢查：用于病灶刮片檢查，敏感度為78%～88%，假陽性少見。直接電子顯微鏡檢查很誘人，因為可在2h內(nèi)完成，但敏感性多變，特異性低。酶聯(lián)免疫吸附試驗用于單純皰疹病毒的檢查，敏感度可達95%，特異性高，但標本收集后如不立即檢查其敏感度下降。亦有采用放射免疫分析法檢查單純皰疹病毒。熒光素標記抗體試驗、間接免疫過氧化物酶試驗或使用單克隆抗體的酶免疫分析法等，這些方法價格低廉，快速，不需要細胞培養(yǎng)技術(shù)。新近產(chǎn)生的用單克隆抗體進行直接熒光素標記抗體染色的離心技術(shù)快速敏感，但更常用于巨細胞病毒的診斷。使用免疫熒光直接檢測HSV抗原，特異性高但敏感性差，且依靠標本質(zhì)量。
酶免疫測定法(EIA)測HSV抗原，有培養(yǎng)放大技術(shù)和直接檢測技術(shù)，研究結(jié)果顯示：HSV EIA對各種來源的標本高度敏感(93.7%)，高度特異(96.6%);方法簡單，重復(fù)性好，快速(4h)，標本受細菌污染時影響結(jié)果，已治愈或正在進行抗病毒治療的病人結(jié)果不可靠。氣管支氣管標本和下呼吸道分泌物的病毒培養(yǎng)，陽性結(jié)果通常需2～5天，但陰性結(jié)果需2周才能確定。
(3)DNA探針技術(shù)的應(yīng)用：DNA探針有助于HSV感染的診斷。DNA探針在細胞形態(tài)學可疑時能確定診斷。幾種因素能混淆形態(tài)學診斷：①HSV包涵體與巨細胞病毒(cytomegalovirus，CMV)和腺病毒(adenovirus)的包涵體相似。②發(fā)生HSV和CMV雙重感染時。③除了HSV其他呼吸道病毒也能產(chǎn)生多核細胞。原位雜交使特殊病毒基因組序列定位，它比傳統(tǒng)的確定方法簡單快速。
(4)聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(PCR)：PCR對HSV病毒感染可提供結(jié)論性依據(jù)，即使在石蠟包埋組織只要有一致的病毒病理改變即可。每次檢查必須有陰性對照組織。盡管存在隱性感染的可能性，但對沒有病毒病理改變的對照組織，PCR檢查HSV仍為陰性。如進行合適的對照，該方法快速(1天內(nèi)完成)，準確特異，敏感性高，能對陳舊或復(fù)雜的標本進行處理。PCR和HSV培養(yǎng)結(jié)果近似，PCR沒有Tzanck涂片和病毒培養(yǎng)的許多技術(shù)和實際限制，PCR在快速診斷可疑HSV病毒感染的免疫抑制病人顯示其優(yōu)越性。
3.血清學檢查 該方法的最大價值是證明病人已經(jīng)感染過HSV，血循環(huán)中的抗HSV抗體是存在反復(fù)感染可能的標志?？贵w滴度增加4倍或更多提示HSV的近期感染。HSV抗體可通過許多方法檢測，包括補體結(jié)合試驗，微量中和試驗和酶免疫分析法。這些方法高度敏感和可靠，但血清學檢查不能區(qū)分內(nèi)源性病毒感染和重新感染。血清學檢查結(jié)果無診斷意義，無助于快速診斷。另一問題為HSV-1和HSV的交叉反應(yīng)，故不能確定HSV急性感染的血清分型。僅僅在急性期血清中無HSV抗體時，血清學檢查可用于診斷HSV初次感染，在這種情況下，如果恢復(fù)期血清中抗體出現(xiàn)，可稱為血清轉(zhuǎn)陽現(xiàn)象(seroconversion)。HSV肺炎時抗體滴度不增高常提示預(yù)后較差，病毒容易廣泛播散。
4.病毒分型 常用3種方法為單純皰疹病毒分型。首先采用和標準的方法為限制性內(nèi)切核酸酶切割，并經(jīng)瓊脂凝膠電泳分離，HSV-1和HSV-2的DNA類型不同，據(jù)此很容易鑒別HSV-1和HSV-2。第2種方法為用熒光素標記的特異性單克隆抗體進行病毒的分型，該方法具有對切片和培養(yǎng)基進行快速和直接檢測的優(yōu)點。第3種方法為使用溴乙烯去氧苷(5-bromovinyldeoxyuridine，BrdU)，該物質(zhì)在細胞培養(yǎng)基保持適當濃度僅可阻滯HSV-1復(fù)制。HSV血清分型對于流行病學很重要，臨床醫(yī)生很少需要這種信息，HSV生殖道感染和HSV腦炎例外。
對于非致命性HSV感染，可進行病毒培養(yǎng)的實驗室檢查，因為這種感染常常臨床上即可鑒別，提取標本后數(shù)天內(nèi)可獲得病毒確認。而對于致命性HSV感染，須進行立即抗病毒治療，所以必須進行快速準確的HSV感染的診斷。最好的方法為免疫熒光染色。嚴重HSV感染患者早期進行抗病毒治療有較好的預(yù)后。雖然在確診之前可進行抗病毒治療，但快速的陽性檢查結(jié)果能促使醫(yī)生盡早開始抗病毒治療。新生兒HSV嚴重感染患者可能僅有皮膚損害作為HSV感染的證據(jù)，快速診斷檢查尤為重要，如耽誤了診斷和治療，將很快發(fā)生其他部位的播散，預(yù)后將明顯惡化。在無癥狀的HSV感染病人，不能過分強調(diào)進行HSV快速診斷試驗。
X線胸片與其他肺部感染較難鑒別。可顯示局限性、多發(fā)性或彌漫性間質(zhì)浸潤，早期可有典型的肺門或彌漫性間質(zhì)密度增加，支氣管壁增厚，隨著病情進展可見斑片狀肺泡填塞。單純皰疹病毒性氣管支氣管炎胸片可正常。
