三級甲等綜合醫(yī)院國營
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(1)熒光抗體試劑中存在凝聚IgG的影響,凝聚IgG可以和B細(xì)胞表面Fc受體結(jié)合出現(xiàn)假陽性,因此,為避免出現(xiàn)凝聚IgG須注意:
①不能使用F/P克分子比值過高的熒光抗體,一般以1~3為宜。
②含低濃度蛋白的熒光抗體低溫保存不穩(wěn)定,一般不應(yīng)低于2mg/ml。
③低溫保存的熒光抗體不可反復(fù)凍融,使用前150000r/min離心30min,除去凝聚物。
(2)活的淋巴細(xì)胞作免疫熒光染色時,在全部試劑中(標(biāo)記抗體、Hank液等)均需加NaN3,以限制細(xì)胞膜的流動性。否則會出現(xiàn)帽狀熒光和吞噬現(xiàn)象,熒光細(xì)胞實際數(shù)下降。
(3)用抗IgG熒光抗體染色時,可由于標(biāo)本中含有抗原一抗體(IgG型)免疫復(fù)合物與B細(xì)胞表面Fc受體結(jié)合,表現(xiàn)為熒光陽性。為此,有人建議用熒光標(biāo)記抗F(ab)2抗體染色,以排除Fc受體被著染。
(4)如果當(dāng)天不能觀察標(biāo)本,則將細(xì)胞懸于熒光抗體保存液中,4℃存放,次日計數(shù)。
近年來由于抗B細(xì)胞表面特異分子(CD19、CD20等)單克隆抗體的問世,因而人們開始傾向于應(yīng)用熒光素標(biāo)記的抗CD19或CD20的單克隆抗體直接與外周血淋巴細(xì)胞反應(yīng);或用抗CD19和CD20的單克隆抗體(第一抗體)先與淋巴細(xì)胞反應(yīng),再與熒光素標(biāo)記的兔或羊抗鼠IgG(第二抗體)結(jié)合,熒光顯微鏡下計數(shù)或流式細(xì)胞術(shù)來計數(shù)外周血B淋巴細(xì)胞。
暫無禁忌人群。
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